导航：X技术最新专利农业,林业,园林,畜牧业,肥料饲料的机械,工具制造及其应用技术一种表面包裹高分子组织工程支架材料的珍珠核及其制备方法

　　11和实施例12制备的珍珠核，与分离自珍珠蚌的外套膜游 离细胞在体外26°C下共培养3天后植入育珠蚌的内脏团植核位点，每蚌植核1粒，各组100 个育珠蚌，养殖2年后采株，对照组采用未包裹组织工程支架的普通市售珍珠核，结果见表 1。结果表明，采用在珍珠核表面包裹组织工程支架后，圆形珍珠的比例大幅度提高， 表1.组织工程支架珍珠核培养珍珠的结果

　　上述实施例只是本发明的部分实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，任何依 据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明 技术方案的范围。

　　1. 一种表面包裹高分子组织工程支架材料的珍珠核，包括珍珠核，其特征在于，在珍珠 核表面覆盖有由生物可降解高分子材料组成的组织工程支架。2. 根据权利要求1所述的珍珠核，其特征在于，所述珍珠核为由贝壳制成的珍珠核、由 珍珠制成的珍珠核或人工合成的珍珠核，所述生物可降解高分子材料，包括生物可降解天 然高分子材料及其与其他成分形成的复合物和生物可降解的合成高分子材料及其与其他 成分形成的复合物。3. 根据权利要求1或2所述的珍珠核，其特征在于，所述的生物可降解天然高分子材 料，包括胶原蛋白、明胶、海藻酸钠、纤维蛋白、琼脂糖、壳聚糖、透明质酸或它们与其他材料 组成的复合物。4. 根据权利要求3所述的所述的珍珠核，其特征在于，所述生物可降解的合成高分子 材料，包括聚乳酸（PLA)、聚乙醇酸（PGA)和聚乳酸-聚乙醇酸共聚物（PLGA)、聚己内酯（ PCL)、聚乙烯醇（PVA)或它们与其他材料组成的复合物。5. 权利要求1-4任一所述的表面包裹高分子组织工程支架材料的珍珠核的制备方法， 包括以下步骤： (1) 将珍珠核表面处理成适合组织工程支架材料粘附的状态； (2) 配制组织工程支架液：组织工程支架材料采用生物可降解天然高分子材料或生物 可降解的合成高分子材料，将组织工程支架材料溶于相应溶剂中，配成合适浓度的组织工 程支架液，当需要加交联剂时添加入适量交联剂，混匀； (3) 在步骤（1)制得的珍珠核表面覆盖厚度为0. 02~2mm的由步骤（2)制得的生物可降 解高分子材料的组织工程支架液。6. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，还包括制备珍珠核支架层所用的模 具： 所述模具由下述的两种方法中的任一方法制备而成，1)其一制备方法为：模具由两个 中空的半球构成，每个半球的内侧面有3根与半球平面垂直的细柱，彼此相隔120°，细柱 的作用在于支撑珍珠核，目的在于使珍珠核周围的空间高度一样，从而使组织工程支架厚 度均匀，与半球的平面垂直是便于制备好支架以后的脱模，细柱的长度在〇.〇2~2_，两半球 合拢后一端球面留有一小孔用于灌注组织工程支架液；2)另一种制备方法是：模具有2种， 模具I由两个结构一样的中空半球构成，每个半球的内侧面有3条突起的棱，其中2条棱 分别位于半球两侧边缘，另一条棱位于半球的中间，棱的长度为球体周长的1/2,3条棱的 末端相应在球的南北极端相交，南极端相交处的棱切除部分形成凹口作为注胶孔，棱的高 度为0. 02~2mm，边缘棱宽度为中间棱的一半；棱的作用在于支撑珍珠核，使将珍珠核放入 模具后珍珠核与半球内面之间的高度一致，棱的高度（H)就是要填充的组织工程支架的厚 度；使用时，先将珍珠核放入一个半球中，然后将另一半球合拢，两个半球的边缘棱在两半 球合拢后其侧面拼接在一起合为一条宽度与中间棱宽度一样的棱，两个半球合拢成一个球 体，棱一端的球面是封闭的，另一端的球面处留出一小孔作为注胶孔用于灌注组织工程支 架液，此端对接处的棱切除部分，留出孔道使组织工程支架液能从此孔道同时灌注到模具 中被棱隔开的4个空间中；模具I用于完成珍珠核组织支架制备的第一步，得到有凹槽的 组织支架珍珠核；模具II由两个中空的半球组成，其内侧表面无突起，半球内径为珍珠核直 径和模具I棱高度的2倍之和，两半球合拢后留有一注胶孔用于灌注组织工程支架液，利 用模具II完成凹槽的填补，得到组织工程支架层厚度相同的球形组织工程支架珍珠核； 支架制备：先将步骤⑴处理过的珍珠核放置于模具I中，将步骤（2)制备的组织工程 支架液灌注入模具I，振荡摇匀10~30分钟，室温下静置1~24小时使组织工程支架材料交 联，在珍珠核表面形成一个有凹槽的凝胶层，降温至4~10°C放置10~30分钟；然后打开模具 取出珍珠核，再放置入模具II中，使上述制得的球形组织工程支架珍珠核的凹口处对准注 胶孔，再注入步骤（2)制备的组织工程支架液，以使第一次注胶时留下的凹槽填满组织工程 支架液，室温下静置1~24小时使组织工程支架材料交联；取出，将注胶孔处的表面磨平，在 冻结温度下冷冻成型，然后放入冷冻干燥机中真空干燥； 当支架制备过程中有加入对细胞有毒的成分时，则需将有毒成分从支架中洗去； 将珍珠核无菌保存备用。7. 根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于， (1) 在珍珠核表面粘附一层多聚赖氨酸膜：将打磨好的普通珍珠核高压灭菌处理，放入 0. 01wt%~0.lwt%的多聚赖氨酸溶液中浸泡10~30分钟，取出，无菌条件下晾干； (2) 无菌条件下配制组织工程支架液：无菌条件下将胶原蛋白配制成浓度为1. 0%~3. 0 wt%的溶液，待胶原蛋白完全溶解后向其中加2. 5vol%的戊二醛溶液作为交联剂，使戊二 醛终浓度为0. 01vol%~0. 05vol%，搅拌均匀； (3) 支架制备：将晾干好的珍珠核放置于模具I中，具体方法为，先将珍珠核放入一个 半球中，然后将另一半球合拢，将步骤⑵制备的胶原蛋白液灌注入模具，振荡摇匀10分钟， 室温下静置6~24小时使胶原蛋白交联，降温至4~10°C处理10~30分钟使珍珠核脱模，然后 打开模具取出珍珠核，得到有4道凹槽的组织工程支架珍珠核；再将其注胶孔处的支架材 料挖去少量，形成一个连通4道凹槽的凹口，放置入模具II中，使凹口处对准注胶孔，再注 入步骤⑵制备的胶原蛋白溶液，使第一次注胶时留下的凹槽填满胶原蛋白溶液，室温下静 置2~12小时使胶原蛋白交联；取出，将注胶孔处的表面打磨平，在一20 °C条件下放置1~6 小时冷冻成型，然后放入冷冻干燥机中线小时，线Pa，冻干温度 为一 20~ - 70Γ; (4) 将珍珠核浸泡于蒸馏水中洗去残留的戊二醛，然后真空干燥将珍珠核去除水分后 无菌包装备用。8. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述制备珍珠核支架层所用的模具： 模具I由两个结构一样的中空半球构成，使用时将2个半球合拢即成为一个完整的球体； 以球体的注胶孔所处位置为南极，其对侧为北极，每个半球的内侧面有3条南北极方向排 列的条状突起的棱，其中的2条棱分别位于半球的两侧边缘，另一条棱位于半球中间，3条 棱的末端在球的南北极处相交，在南极端相交处的棱切除部分形成凹口作为注胶孔；棱的 作用在于支撑珍珠核，使珍珠核放入模具后珍珠核外的空间的高度就是组织工程支架的厚 度；两个半球合拢成一个球体，棱一端的球面是封闭的，另一端的球面处留出一小孔作为注 胶孔用于灌注组织工程支架材料；模具I用于完成珍珠核组织支架制备的第一步，得到表 面有凹槽的组织工程支架珍珠核；模具II由两个中空的半球组成，其内侧表面无突起，半球 内径为珍珠核直径和模具I棱高度的2倍之和，两半球合拢后留有一注胶孔用于灌注组织 工程支架材料，利用模具II完成凹槽的填补，最后得到支架层厚度相同的球形组织工程支 架珍珠核。9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的胶原蛋白采用来自于脊椎动 物的胶原蛋白或来自于无脊椎动物的胶原蛋白或经过基因工程加工改造过的胶原蛋白。

　　【专利摘要】本发明公开b一种表面包裹高分子组织工程支架材料的珍珠核及其制备方法/b，所述b包裹高分子组织工程支架材料的珍珠核，/b包括珍珠核，其特点为在珍珠核表面覆盖有由生物可降解高分子材料组成的组织工程支架。在珍珠核外表面制造一个厚度基本均匀的适合细胞贴附、迁移、分裂生长的细胞外基质环境，接种外套膜细胞后，外套膜细胞能在珠核周围形成一个厚度基本均匀的珍珠囊，解决了传统外套膜细胞小片植入法存在的细胞在珠核周围迁移后分布不均匀导致异形珍珠的问题，可以大大提高了圆形优质珍珠的比例，也使得珍珠核与育珠蚌的相容性更好，不易吐核，从而提高珍珠养殖的经济效益。九游官方平台